β-谷甾醇对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞功能的影响及机制

目的 研究β-谷甾醇对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞MH7A功能的影响及其机制.方法 使用网络药理学筛选β-谷甾醇的作用靶点及治疗RA的靶点,两者取交集后进行拓扑分析寻找治疗RA的最关键靶点.用不同浓度(0、5、10、20、40 μmol/L)的β-谷甾醇处理MH7A细胞并用CCK-8法检测细胞活性,筛选β-谷甾醇的最适给药浓度.采用10 ng/mL肿瘤坏死因子(TNF-α)体外诱导MH7A细胞后,加入β-谷甾醇(最适给药浓度)处理.CCK-8法和EdU法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell侵袭法分别检测细胞迁移及侵袭能力;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的水平;qRT-PCR法和Western blot法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA和蛋白表达水平.MH7A细胞转染PPARα小干扰RNA,并通过上述实验方法检测PPARα敲低后β-谷甾醇对MH7A细胞增殖、迁移、侵袭、炎症因子分泌及PPARα蛋白表达的影响.结果 PPARα是β-谷甾醇治疗RA的最关键靶点,β-谷甾醇的最适给药浓度为20 μmol/L.与模型组相比,β-谷甾醇组MH7A细胞活力显著降低、细胞增殖数显著减少(P＜0.05),细胞迁移率显著降低、细胞侵袭数显著减少(P＜0.05),IL-1β水平、IL-6水平均显著降低(P＜0.05),PPARα mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P＜0.05).与阴性对照小干扰RNA组相比,敲低PPARα后细胞活力上升35.6%(P＜0.05),细胞增殖数、细胞迁移率和细胞侵袭数均显著增加(P＜0.05),IL-1β水平及IL-6水平均显著升高(P＜0.05).结论 β-谷甾醇可以抑制TNF-α诱导的MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌,其作用机制与激活PPARα通路有关.