基于牛肠道病毒重组VP2蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为了解牛肠道病毒(bovine enterovirus,BEV)在我国牛群中的感染情况,建立了基于BEV VP2蛋白的间接ELISA抗体检测方法.结果发现重组VP2蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性形式表达.间接ELISA检测方法其抗原包被最佳浓度为100 ng/孔,最佳封闭条件是10％马血清封闭1.5 h,一抗最佳稀释度是1∶100,二抗最佳稀释度是1∶200.该方法具有良好的特异性、重复性和灵敏性,与间接免疫荧光方法相比较,符合率为92.3％.对全国7个不同省市的1 964份牛血清样本进行检测,显示总体阳性率为52.6％,表明BEV已在我国牛群中普遍流行.本试验建立的BEV抗体间接ELISA方法,为BEV感染的诊断和血清学调查提供了技术支撑.