METTL3通过m6A修饰β-catenin影响顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复

目的 基于顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤细胞模型,探讨甲基转移酶样 3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导的 N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰β-catenin在肺癌中的作用机制.方法 通过顺铂诱导,建立 A549细胞DNA损伤模型,再接受合成 METTL3 siRNA和 siRNA空载质粒(NC)转染.将细胞分成对照组、顺铂诱导组、顺铂诱导+siRNA组、顺铂诱导+NC 组,CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,qRT-PCR 和Western blot检测 METTL3 mRNA 和蛋白表达,Western blot 检测各组细胞中β-catenin、H2AX、ERCC1、NDRG1 和ATM的蛋白表达,m6A RNA 甲基化定量试剂盒测定 RNA 中 m6A 的水平.结果 成功转染 METTL3 siRNA 后,A549 细胞中 METTL3 mRNA表达降低(P＜0.01).与对照组相比,顺铂诱导组细胞增殖能力下降(P＜0.01),凋亡率上升(P＜0.01),细胞周期 G0～G1 期延长,S期和 G2～M期均缩短(均P＜0.01),METTL3 mRNA 和蛋白表达水平下调(均P＜0.01),H2AX、ERCC1、NDRG1 蛋白表达上升(均P＜0.01),ATM和β-catenin蛋白表达下降(均P＜0.01),m6A水平显著下调(P＜0.01);与顺铂诱导组相比,顺铂诱导+siRNA 组上述趋势更加显著;而顺铂诱导+NC 组细胞与其差异无统计学意义.结论 METTL3 敲低通过m6A修饰β-catenin抑制顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复.