特应性皮炎免疫浸润相关miR-155靶基因的筛选及验证

目的 筛选与特应性皮炎(AD)免疫浸润相关的miR-155靶基因,并进行细胞实验验证.方法 从GEO数据库获取AD基因表达谱数据集GSE121212和GSE157194,筛选出AD皮损区差异表达基因,并进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析,构建蛋白互作网络(PPI).基于CIBERSORT算法,分析AD患者免疫细胞浸润情况.利用miRNet网站预测miR-155靶基因,并筛选与AD免疫浸润相关的miR-155靶基因.将人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞分为control组和TI组,TI组细胞加入TNF-α和IFN-γ构建炎症模型,control组常规培养,采用qRT-PCR法检测TI组、control组细胞中miR-155.取TI组HaCaT细胞分成TI + miR-155 mimics组、TI + mimics NC组,TI + miR-155 mimics组转染miR-155过表达质粒miR-155 mimics,TI + mimics NC组转染过表达对照质粒mimics NC,采用qRT-PCR法检测TI + miR-155 mimics组、TI + mimics NC组细胞中CXCL1、CXCL8 mRNA.结果 筛选得到519个AD皮损区差异表达基因.GO功能富集分析结果显示,差异表达基因主要参与免疫系统过程、免疫反应、对外部刺激的反应、防御反应、免疫系统的调节等生物过程,KEGG通路富集分析结果显示,通路主要富集在细胞因子—细胞因子受体相互作用、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、IL-17信号通路等炎症相关信号通路.成功构建出由67个节点、146条边组成的PPI网络图.树突状细胞、M2巨噬细胞和肥大细胞在表皮免疫微环境中占比最高,免疫浸润最明显.与AD免疫浸润相关性比较高的miR-155靶基因为CXCL1、CXCL8.TI组细胞中miR-155相对表达量高于control组(P<0.05),TI + miR-155 mimics组细胞中CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量高于TI + mimics NC组(P均<0.05).结论 筛选获得的与AD免疫浸润相关的miR-155靶基因是CXCL1、CXCL8基因.高表达miR-155可提高炎症时HaCaT细胞中CXCL1、CXCL8基因的表达水平.