表达SDF-1／HOXB4融合基因的间充质干细胞对造血干细胞体外扩增及干性维持的作用

目的构建SDF-1、HOXB4和SDF-1／HOXB4融合基因腺病毒表达载体，转染体外培养的间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs），比较其对CD34^＋细胞体外扩增及干性维持的影响。方法全基因合成SDF-1／HOXB4基因序列，以其为模板，经PCR、酶切及测序鉴定，构建表达SDF-1、HOXIM和SDF-1／HOXB4的3种腺病毒载体，转染至293A细胞进行包装和病毒滴度测定，并转染体外培养的MSCs，分别为SDF-1组、HOXB4组和S-H组，转染空腺病毒载体的为阴性对照，转录水平及蛋白水平检测MSCs中外源基因表达。4组MSCs和CD34^＋细胞共培养7d，计数细胞并检测其CD34^＋表达。结果测序表明3种腺病毒载体构建成功，在293A细胞中成功包装并获取病毒，RT—PCR和Westernblot检测3个基因在MSCs细胞中稳定高表达，MSCs和CD34^＋细胞共培养，扩增细胞数目SDF-1组（9．52±2．24）、S-H组（8．11±2．34）显著高于对照组（4．85±2．53，P〈0．05），S—H组（CD34^＋表达为1．85％）较SDF-1组（1．20％）、HOXIM组（1．28％）更利于CD34^＋细胞干性维持。结论表达SDF-1／HOXB4融合基因的MSCs对CD34^＋细胞体外扩增及干性维持作用更好。