6种转录本人早幼粒细胞性白血病基因真核表达质粒的构建及其重组蛋白的亚细胞定位分析

目的 构建6种转录本人早幼粒细胞性白血病(human promyelocytic leukaemia,hPML)基因的真核表达质粒,并分析其重组蛋白的亚细胞定位情况.方法 根据GenBank中登录的hPML基因序列设计引物,RT-PCR法扩增获得6种转录本hPML基因片段(hPML Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ),分别连接至真核表达载体pCAGGS,获得6种转录本hPML基因的真核表达质粒.将6种真核表达质粒分别转染293T细胞,Western blot法检测蛋白表达情况;分别转染至Vero细胞,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)法检测亚细胞定位情况.结果 6种真核表达质粒中的目的基因片段均与GenBank中登录的hPML基因序列一致.6种重组蛋白均可与Myc抗体发生特异性结合,其中重组蛋白hPMLⅠ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ定位于细胞核及细胞质内,重组蛋白hPMLⅦ主要定位于细胞质,极少定位于细胞核中.结论 构建的6种转录本hPML基因真核表达质粒均可在哺乳动物细胞中正确表达,表达的重组蛋白同时定位于细胞核及细胞质或主要定位于细胞质中.本研究为重组蛋白hPML抗病毒等生物学功能的深入研究提供了实验依据.