RRS1对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制

目的 探讨核糖体合成调控因子 1(RRS1)基因对乳腺癌BT549 细胞增殖和迁移的影响及其作用机制.方法 通过 Western Blot实验检测人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7 细胞)和人正常乳腺上皮 MCF-10A细胞 RRS1 蛋白的表达量.通过免疫荧光检测 RRS1 在BT549 细胞中的定位.慢病毒感染法建立RRS1 敲低的BT549 细胞系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot实验检测感染阴性对照慢病毒细胞(Con组)和感染 shRNA-RRS1 慢病毒细胞(sh-RRS1 组)中RRS1 mRNA 和蛋白相对表达量.采用CCK8 实验和集落形成实验检测 RRS1 对 BT549 细胞增殖能力的影响,通过细胞划痕实验、Transwell 实验检测RRS1 对BT549 细胞迁移能力的影响.采用Western Blot实验检测两组细胞AKT-mTOR相关信号通路蛋白及其下游缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达量.结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7 乳腺癌细胞系中 RRS1 相对表达量与人正常乳腺上皮 MCF-10A 细胞相比均显著增高(F=48.92,P<0.05).免疫荧光染色显示,RRS1 主要在BT549 细胞的细胞核和核仁表达,细胞质也有少量表达.与Con组进行比较,sh-RRS1 组RRS1 mRNA 和蛋白表达量显著降低,增殖和迁移能力均明显减弱,p-AKT、p-mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达量均显著降低(t=6.29～32.04,F=1 368.00、2 699.00,P<0.05).结论 RRS1可能通过 AKT-mTOR 通路促进乳腺癌细胞的增殖和迁移.