TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR检测番茄斑驳花叶病毒

番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)为近年来发现的一种烟草花叶病毒属新成员,是茄科作物上危害严重的主要病毒之一,近几年EPPO全球数据库报道多个国家从进境辣椒和番茄种子中截获该病毒.为防止番茄斑驳花叶病毒通过种子种苗进行传播扩散,本文根据该病毒GenBank中不同分离株外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了 TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR检测ToMMV的方法.结果表明,本检测方法特异性强,对烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)、番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)、番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,TomRSV)6 种病毒均无交叉反应,且检测方法灵敏度高,对RNA模板最低检测限达到了 0.08 pg/μL,与普通RT-PCR方法相比灵敏度提高了 100倍.研究证明本文建立的TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR检测ToMMV技术特异性强、灵敏度高,适用于口岸和实验室开展ToMMV快速检测和精准鉴定.