基于网络药理学和实验验证探索千金三黄汤加减治疗甲型流感病毒的作用机制

目的 预测基于千金三黄汤加减的"麻黄-黄芩-黄芪-鱼腥草"配伍治疗甲型流感病毒感染的潜在作用靶点及作用机制,以期丰富抗流感病毒的复方配伍.方法 通过中药系统药理学分析平台数据库(TCMSP)、PubChem数据库、Swiss Target Prediction数据库筛选麻黄、黄芩、黄芪、鱼腥草的活性成分与潜在靶点.使用GeneCards数据库筛选流感病毒感染的疾病相关靶点,利用微生信平台中"集合运算Venn图"获得药物与甲型流感病毒的交集靶点.通过Cytoscape 3.8.2 软件构建"药物-活性成分-作用靶点"网络并进行拓扑分析.利用String数据库构建蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络,并通过Cytoscape 3.8.2 软件进行拓扑分析,获得核心靶点.并应用Metascape数据库进行GO及KEGG富集分析.流感病毒PR8 构建C57BL/6J小鼠感染模型,观察小鼠一般状态、肺指数、肺组织病理,ELISA及RT-PCR对部分核心靶点及抑炎因子表达进行检测.结果 得到"麻黄-黄芩-黄芪-鱼腥草"配伍的活性成分 86 个,潜在靶点 505 个.甲型流感病毒相关的疾病靶点 1531 个.药物与疾病的交集靶点 175 个.GO富集获得424 个条目,KEGG通路富集获得 202 个条目,涉及PI3K-Akt信号通路、流感通路、COVID-19 通路、C型凝集素受体信号通路、TNF信号通路、IL-17 信号通路、凋亡通路、Th17 分化等多个流感相关的通路.实验结果表明,中药干预后可以改善感染小鼠一般状态及感染诱发的结肠缩短,减轻肺指数与肺组织病理损伤,下调核心靶点中促炎因子 TNF-α、IL-6、MAPK3、IL-1βmRNA 的表达、上调抑炎因子IL-10的表达.结论 基于千金三黄汤加减的"麻黄-黄芩-黄芪-鱼腥草"配伍可以多成分、多途径发挥抗甲型流感病毒的作用,可能通过TNF-α、IL-6、MAPK3、IL-1β、Akt1 等核心靶点调控PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、IL-17 信号通路等减轻甲型流感病毒所致的肺组织免疫炎性损伤,初步证实了该配伍治疗甲型流感病毒感染的部分作用靶点及对感染小鼠的保护作用.