猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪流感病毒四重PCR检测方法的建立

为了快速、准确检测 4 种猪呼吸道病毒,根据 NCBI GenBank 数据库中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒 2 型(PCV2)和猪流感病毒(SIV)的基因序列,设计4 对特异性引物,建立一种能通过扩增片段大小来同时鉴别检测PRRSV(111 bp)、PRV(173 bp)、PCV2(273 bp)、SIV(445 bp)的四重PCR检测方法.特异性试验结果显示,扩增 PRRSV、PRV、PCV2、SIV 模板均能得到预期特异条带,而扩增灭菌水(阴性对照)、CSFV、JEV不产生任何条带.敏感性试验结果显示,该方法最低病毒核酸检出量分别为PRRSV(6.5×104copies/μL)、SIV(2.68×105copies/μL)、PCV2(7.16×105 copies/μL)、PRV(2.37×104 copies/μL).用所建立的四重和各单一PCR方法检测 45 份临床样品,四重 PCR 的阳性检出率分别为 PCV2 22.2%(10/45)、PRRSV 17.7%(8/45)、PRV 4.4%(2/45)、PRRSV+PCV2 13.3%(6/45),四重PCR方法与单一PCR方法的阳性符合率为 100%.表明建立的病毒四重PCR 检测方法特异性强、敏感性高,可用于上述 4 种呼吸道病毒的鉴别检测.