线粒体内膜转位酶13调控肝星状细胞活化和增殖的实验研究

目的:研究线粒体内膜转位酶13(TIMM13)的表达对小鼠肝星状细胞活化和增殖的影响,探讨TIMM13在肝纤维化的的进展中的作用.方法:用5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)作用小鼠肝星状细胞系JS-1细胞24h,诱导JS-1细胞活化,实验分为对照组(0ng/mL组)、5ng/mL组、10ng/mL组、20ng/mL组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹(western blotting)法检测各组TIMM13、肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的mRNA与蛋白表达水平;在JS-1细胞中分别敲低和过表达TIMM13,将实验分为空载组(对照组)和沉默组/过表达组,用RT-qPCR和westernblotting法检测TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA与蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测沉默/过表达TIMM13的第0、第24、第48和第72小时细胞的增殖情况.结果:与对照组比较,5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组中TIMM13的mRNA表达升高(均P＜0.05),5 ng/mL组、10ng/mL组中TIMM13蛋白表达水平增高(均P＜0.05);沉默组中TIMM13、α-SMA和COL1A41的mRNA表达水平相对于对照组降低(均P＜0.01),TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平降低(均P＜0.01),在第48小时和第72小时JS-1细胞增殖能力被明显抑制(均P＜0.05),而过表达组中TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA表达水平升高(均P＜0.05),TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平升高(均P＜0.05),在第48小时和第72小时促进了JS-1细胞的增殖能力(均P＜0.05).结论:TIMM13的表达促进小鼠肝星状细胞的活化和增殖,进而促进了肝纤维化的发展.