丙烯腈致大鼠肝细胞损伤中PI3K/AKT信号通路的作用

为探讨丙烯腈(acrylonitrile,ACN)致大鼠肝细胞损伤中PI3K/AKT信号通路的作用,随机将60只雄性SD大鼠分为5组:对照组,ACN低、中、高剂量染毒组和干预组.分别给予玉米油,11.5 mg·kg-1、23.0 mg·kg-1、46.0 mg·kg-1 ACN和300 mg· kg-1 N-乙酰基半胱氨酸(NAC)+46.0 mg·kg-1 ACN灌胃染毒,灌胃容积为5.0 mL·kg-1,1次·d-1,6 d·周-1,共28 d.最后一次染毒1 d后,大鼠麻醉心脏采血后处死,取肝脏进行实验.(1)原位末端标记法(TUNEL)观察肝细胞凋亡水平;(2)定量逆转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测pi3k、akt、bad、bcl-2、cyt c和caspase-3基因表达水平;(3)免疫印迹法(WB)检测PI3K/AKT信号通路和线粒体凋亡通路相关蛋白的表达水平.研究表明:(1)细胞凋亡方面.ACN低、中剂量组凋亡细胞较对照组显著增多(P＜0.05).(2)mRNA相对表达水平方面.与对照组相比,ACN低剂量组bad、caspase-3显著升高(P＜0.05),bcl-2显著降低(P＜0.05);ACN 中剂量组 pi3k、bcl-2 降低(P＜0.05),cytc升高(P＜0.05);ACN 高剂量组 pi3k、bcl-2 降低,bad升高(P＜0.05);ACN 各剂量组akt无显著差异(P＞0.05);NAC组bad较ACN高剂量组降低(P＜0.05).(3)蛋白相对表达水平方面.与对照组相比,ACN低剂量组 pro-Caspase-3 降低,cleaved-Caspase-3 升高(P＜0.05);ACN 中剂量组 PI3K、p-Bad 和 pro-Caspase-3 降低,Caspase-9、Bad、Bax和 Cyt c 升高,Bcl-2/Bax 值降低(P＜0.05);ACN 高剂量组 p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、p-Bad 和 pro-Caspase-3 降低,Bad、Bax、Caspase-9、Cyt c和cleaved-Caspase-3升高,Bcl-2/Bax值降低(P＜0.05);ACN各剂量组AKT无显著差异(P＞0.05).与ACN高剂量组相比,NAC 组 PI3K、p-Bad 和 pro-Caspase-3 升高,Bax、Caspase-9 和 cleaved-Caspase-3 降低(P＜0.05).ACN 抑制 PI3K/AKT 信号通路及激活线粒体凋亡途径可能是大鼠肝细胞损伤的原因之一.