一例复合杂合突变导致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症患者的表型与遗传学分析

目的 对1例遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者进行凝血指标与基因水平的分析,初步探讨其分子发病机制.方法 用ELISA方法检测FⅪ 抗原(FⅪ :Ag),用一期凝固法检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、FⅪ 活性(FⅪ :C)等相关凝血指标,并进行表型诊断.用Sanger测序法分析先证者F11基因所有外显子、侧翼序列、5'和3'端非翻译区及家系成员相应的突变区域DNA.用多重序列对比软件ClustaX-2.1-win分析突变位点的序列保守性;用MutationTaster、 PolyPhen-2、 PROVEAN和SIFT在线生物信息学软件评价突变的危害性;用Swiss-Pdb Viewer软件分析氨基酸突变后FⅪ 蛋白空间构象和次级键的改变.结果 先证者活化部分凝血活酶时间(APTT)延长为84.7 s(参考范围:29.0～43.0 s),FⅪ :C和FⅪ :Ag分别降低为3％和1.6％;大儿子、二女儿、大孙子、二外孙女APTT均稍延长,FⅪ :C、FⅪ :Ag均有所降低,为正常对照的50％左右.测序发现先证者F11基因存在第8号外显子c.841C＞T(p.Gln263stop)杂合无义突变和第13号外显子c.1546G＞A(p.Va1498Met)杂合错义突变;其大儿子和大孙子存在p.Va1498Met杂合错义突变,二女儿和二外孙女存在p.Gln263Stop杂合无义突变.保守性分析表明Va1498在同源物种间高度保守,Gln263在同源物种间中等保守;Mutation Taster评分结果显示p.Gln263stop和p.Va1498Met的结果分别为1.000分和0.998分,预示突变为有害突变,可引起疾病;PolyPhen-2、PROVEAN和SIFT评估p.Va1498Met的结果分别为1.00、-2.09、0.001,表明突变对蛋白质正常功能运行有害.p.Va1498Met突变蛋白模型显示,突变前Va1498与Ala517之间有两条氢键,当突变为Met498后,与Ala517之间的氢键没有变化,但与Pr0560及Thr575各增加了一条氢键,并与Thr575形成了空间位阻,破坏了FⅪ 蛋白的催化结构域.结论 先证者p.Gln263stop和p.Va1498Met复合杂合突变是导致其FⅪ缺陷症的分子机制,其中p.Va1498Met突变为国内首次报道.