纯合子p.Met527Ile错义突变导致遗传性FⅫ缺陷症家系分析

目的 对一个近亲结婚导致的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行表型和基因突变分析,初步探讨其分子发病机制.方法 检测先证者及其家系成员(共3代5人)活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、FⅫ活性(FⅫ∶C)和FⅫ抗原(FⅫ∶Ag)以明确表型诊断.采用DNA直接测序分析F12基因的所有外显子、侧翼、5'和3'非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序进一步证实所发生的突变.通过多个生物信息学软件(clustalx-2.1-win、Mutation Taster、PolyPhen-2、PROVEAN、SIFT和Swiss-Pdb Viewer 4.1.0)分析突变氨基酸的保守性和对蛋白质可能的影响,构建突变前后的蛋白结构模型分析突变对蛋白质空间结构的改变及影响.结果 先证者APTT延长,较正常对照显著延长为101.0 vs 36 s,FⅫ∶C和FⅫ∶Ag极度降低,均为1.0％(正常范围为72％～113％).基因分析显示,先证者第13外显子存在c.1638 G＞A纯合错义突变,导致527位异亮氨酸取代蛋氨酸(p.Met527Ile);其母亲、儿子和女儿均携带了p.Met527Ile杂合子.生物信息学和突变模型分析表明,Met527在人类与7种同源物种间呈高度保守,p.Met527Ile可能是有害的,并改变了蛋白质的结构和功能.结论 p.Met527Ile错义突变国内外鲜见报道,并可能与该家系FⅫ水平降低有关.