基于ITS2序列及二级结构对药用黄芪及混伪品的鉴别研究

为了有效地进行药用黄芪及其混伪品的分类鉴定,本实验对收集的蒙古黄芪、膜荚黄芪共32份材料进行了ITS2序列的扩增及双向测序,测序结果经CExpress软件拼接,去除两端5.8S和28S序列后,获得完整的ITS2序列;并从GenBank上下载黄芪混伪品蓝花棘豆、锦鸡儿、红芪、蜀葵的ITS2序列各3条,利用MEGA7计算种内、种间遗传距离,对各序列进行差异性分析;利用Neighbor-joining(NJ)法基于ITS2序列(一级结构)和基于联合ITS2序列及其二级结构构建系统发育树.结果 表明:蒙古黄芪与膜荚黄芪平均ITS2序列长度均为216bp,平均GC含量分别为50.00％、50.46％,两种药用黄芪与蓝花棘豆在ITS2序列的长度和GC含量的相似性最高,与蜀葵存在较大的差异;药用黄芪与蓝花棘豆的种间距离最小,与红芪、锦鸡儿、蜀葵遗传距离较大;基于ITS2序列(一级结构)和基于联合ITS2序列与其二级结构构建的系统发育树表明:两种系统发育树的拓扑关系基本一致,都可以有效地鉴别药用黄芪及其混伪品;此外二级结构信息的加入,也使得ITS2序列在构建系统发育树中末端分支变多,分辨率与支持率上也有所提高,对药用黄芪以及混伪品的亲缘关系得到了进一步的体现.为药用黄芪及其混伪品的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据.