DNA损伤修复蛋白NBS1在BPD新生大鼠模型中表达及其作用的研究

目的:研究DNA损伤修复蛋白奈梅亨断裂综合征蛋白1(Nijmegen breakage syndrome protein 1，NBS1)在新生大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia ，BPD)模型中的动态表达规律，探讨其对BPD疾病发生、发展的影响。方法:新生大鼠在生后12 h内随机分为BPD模型组50只和对照组50只，模型组吸入氧浓度为80%~85%，对照组吸入空气，两组分别于1 d、3 d、7 d、10 d、14 d收集肺组织标本，分离并培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ epithelial cell，AECⅡ)。光镜下观察肺组织形态学、辐射状肺泡计数(radial alveolar count，RAC)评价肺泡发育，免疫组织化学法及细胞免疫荧光观察NBS1的定位及表达，蛋白质免疫印迹、实时荧光定量PCR方法检测NBS1的表达水平。结果:与对照组相比，模型组RAC值从生后7 d开始显著降低(对照组7.58±1.24，模型组5.42±1.24， P<0.01)。免疫组织化学法可见NBS1蛋白主要定位在肺泡上皮细胞的细胞核内，模型组1 d时主要在细胞核内表达，随暴露时间延长，胞质染色细胞数量增多，核内表达减弱。细胞免疫荧光可见NBS1蛋白在AECⅡ中主要定位于细胞核内，与对照组相比，模型组3 d开始细胞质染色增强，细胞核染色逐渐减弱，14 d时主要定位于细胞质。蛋白质免疫印迹结果显示，与对照组相比，模型组NBS1的蛋白表达于生后1d达高峰(对照组0.72±0.29，模型组1.28±0.22， P<0.01)，随后逐渐下降，14 d表达低于对照组(对照组0.73±0.19，模型组0.49±0.11， P<0.05)。同样与对照组相比，模型组NBS1的mRNA表达水平于生后1 d达高峰(对照组1.00±0.00，模型组1.18±0.06， P<0.01)，随后逐渐下降，14 d表达低于对照组(对照组1.07±0.13，模型组0.76±0.11， P<0.05)。 结论:在新生大鼠BPD模型中，NBS1蛋白的表达下调及核富集障碍可能影响了DNA损伤应答，这可能是介导BPD氧化应激损伤发生的机制之一。