氟暴露下SH-SY5Y细胞ERK5信号转导通路的改变

目的 检测ERK5 信号通路中磷酸化的细胞外信号调节激酶5(P-ERK5)及P-ERK5 在氟暴露下SH-SY5Y细胞中的表达,探讨ERK5 信号通路与氟暴露下SH-SY5Y神经损伤机制的关系.方法 用不同剂量氟化钠(NaF,0.000、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500、1.000、2.000、3.000、4.000 及5.000 mmol/L)处理SH-SY5Y细胞24h及48 h,采用CCK8 实验筛选出低和高剂量氟中毒浓度;再以正常组SH-SY5Y细胞为参照,用低、高剂量氟化钠剂量分别处理SH-SY5Y细胞24h和 48 h,采用实时荧光定量PCR检测处理 48h 时各组细胞的ERK5 mRNA水平,用Western blot检测P-ERK5、ERK5 蛋白表达水平.结果 染氟处理后,0.500、1.000 mmol/L NaF处理SH-SY5Y细胞24h及 48h细胞的存活率均低于正常对照组(P＜0.05),可作为低剂量组和高剂量组的染氟剂量;染氟48h时,对照组、低剂量组和高剂量组SH-SY5Y细胞中ERK5 的mRNA表达水平分别为 1.00±0.00、0.85±0.08、0.94±0.21,组间比较均无统计学意义.染氟 24h时,P-ERK5 蛋白高氟组较低氟组和正常组表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而染氟 48h时,染氟组P-ERK5 蛋白表达升高,各组间比较均有统计学意义(P＜0.05),染氟24h和48h正常组、低氟组、高氟组P-ERK5 蛋白表达水平分别为(0.20±0.05、0.28±0.04、0.50±0.18)、(0.28±0.01、0.46±0.02、0.61±0.08);染氟 24h后,总ERK5 蛋白升高,高氟组较低氟组、正常组有意义(F =14.731,P＜0.05),而染氟 48h后,染氟组较正常组升高有统计学意义(F =17.877,P＜0.05),染氟24h和48h总ERK蛋白表达水平分别为(0.34±0.04、0.36±0.05、0.67±0.12),(0.55±0.02、0.72±0.03、0.78±0.08).结论 ERK5 信号通路中P-ERK5 蛋白及ERK5 蛋白在慢性氟中毒时被激活,随着染氟时间与染氟剂量增加其表达水平出现逐渐升高,其可能参与代偿性神经保护机制对抗氟的神经毒性作用.