黄芪甲苷对高糖环境下脂肪干细胞衰老的延缓作用

目的 探讨黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,Ast)减缓高糖环境下人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)衰老的作用.方法 通过用含不同浓度葡萄糖的培养基培养hADSCs,筛选出最适高葡萄糖浓度;用不同浓度的Ast干预高糖环境下的hADSCs,筛选出最适Ast干预浓度.将hADSCs分为4组:对照组用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养;甘露醇组用含5.5 mmol/L葡萄糖和19.5 mmol/L甘露醇的培养基培养;高糖组用含最适高浓度葡萄糖的培养基培养;Ast组用含最适高浓度葡萄糖和最适浓度Ast的培养基培养.4组均培养72 h,通过SA-β-Gal染色观察细胞衰老,Annexin Ⅴ-FITC/PI 检测凋亡;qRT-PCR 及 Western 印迹检测 hADSCs 中 p16、Pinkl、Parkin、LC3(LC3 Ⅱ/Ⅰ)及 p62 的表达情况;透射电镜观察线粒体及自噬小体情况.结果 最适高葡萄糖浓度为25 mmol/L,最适Ast干预浓度为20 mg/L.Annexin V-FITC/PI检测显示,与对照组比较,高糖组hADSCs凋亡增加(P＜0.001);与高糖组比较,Ast组hADSCs凋亡减少(P＜0.001).SA-β-Gal染色显示,与对照组比较,高糖组衰老细胞增加(P＜0.001);与高糖组比较,Ast组衰老细胞减少(P＜0.001).qRT-PCR及Western印迹显示:与对照组比较,高糖组hADSCs中p16及p62表达增加(P＜0.001),LC3、Pink1及Parkin表达减少(P＜0.001);与高糖组比较,Ast组hADSCs中p16及p62表达减少(P＜0.001),LC3、Pink 1及Parkin表达增加(P＜0.01).透射电镜下发现,高糖组线粒体肿胀变形、体积较大,自噬小体较少,Ast组线粒体肿胀变形减轻、体积较小,可见大量自噬小体.结论 Ast可减缓高糖引起的hADSCs衰老,可能与其上调线粒体自噬有关.