抗虫耐除草剂玉米瑞丰125 RPA快速检测方法的建立

ZHAI Shan-shan, CUI Dan-dan, YANG Yao, TANG Min, WU Yu-hua, LI Jun, LI Yun-jing,GAO Hong-fei,WU Gang

Chinese Journal of Oil Crop Sciences（2023）

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摘要

瑞丰125为农业农村部首批获得生产应用农业转基因生物安全证书的抗虫耐除草剂转基因玉米之一.为给监管转基因生物安全提供支撑,利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术,针对瑞丰125的转化体插入位点序列设计了引物并进行筛选,对反应的温度、时间和引物浓度进行了优化.结果显示,RPA体系在30～45℃范围内,20 min即可有效扩增,比PCR检测时间大大缩短.引物浓度会影响RPA的扩增效率,引物终浓度为0.35 μmol/L时扩增效果最好.同时对RPA检测方法的特异性、灵敏度等进行考察,结果表明该检测方法的特异性良好,检测灵敏度可达到36拷贝.该恒温快速的检测方法为瑞丰125的快速检测提供依据,为商业化转基因作物的监管提供支撑,有望用于转基因成分的现场快速检测.

关键词

isothermal amplification,recombinase polymerase amplification,rapid detection,transgenic or-ganism,Ruifeng125

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