转录因子ID1对绵羊卵泡颗粒细胞增殖和凋亡的影响

DNA结合抑制因子1(inhibitor of DNA binding 1,ID1)在机体内广泛存在,影响细胞的增殖和凋亡.为揭示转录因子ID1在绵羊(Ovis aries)卵泡颗粒细胞增殖和凋亡过程中的作用,本研究构建了真核过表达载体pcDNA3.1-ID1,设计合成了ID1 RNA干扰片段(siID1),将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞进行卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)处理,24 h后利用qRT-PCR检测ID1基因表达.结果显示,FSH处理细胞后,ID1基因表达量极显著降低(P＜0.01).进一步将pcDNA3.1、pcDNA3.1-ID1、siID1和siNC(siID1的阴性对照)转染颗粒细胞,采用CCK-8法检测转染5d内颗粒细胞的增殖,转染48h后,采用JC-1试剂盒检测颗粒细胞的凋亡,并利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达变化.结果显示,过表达ID1的颗粒细胞存活率降低,JC-1绿色荧光增强,增殖相关基因周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,CDK2)、周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)和细胞周期素D2(cyclin D2,CCND2)的表达量显著降低(P＜0.05),凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl2)的表达量显著降低(P＜0.05),Bcl2相关X蛋白(Bcl2-associated X protein,Bax)基因表达量显著升高(P＜0.05),胱天蛋白酶3(caspase-3,Casp3)基因表达量极显著升高(P＜0.01);抑制ID1表达颗粒细胞存活率升高,JC-1绿色荧光减弱,增殖相关基因CDK2和CCND2的表达量极显著升高(P＜0.01),CDK4基因表达量显著升高(P＜0.05),凋亡相关基因Bcl2的表达量极显著升高(P＜0.01),Bax基因表达量显著降低(P＜0.05).综上所述,转录因子ID1抑制了绵羊颗粒细胞的增殖且促进了颗粒细胞的凋亡,本研究结果为探讨ID1在卵泡颗粒细胞中的生物学功能及揭示其在卵泡发育中的作用提供了基础资料.