TRPC促进肾小球系膜细胞外基质沉积的机制研究

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential canonical,TRPC)促进大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积的作用机制.方法 免疫荧光染色方法观察 TRPC1 和TRPC6在 HBZY-1 细胞上的定位及表达;给予 AngⅡ干预 HBZY-1 细胞后,应用 qRT-PCR 和 Western blotting 方法检测 Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路关键蛋白和 ECM 沉积指标[α-SMA、CollagenⅢ(ColⅢ)和 Fibronectin(Fn)]的mRNA和蛋白表达;siRNA技术沉默TRPC1 和TRPC6 表达后,检测 ECM沉积指标的表达;Fluo-4AM Ca2+成像技术测定细胞内Ca2+内流的变化情况.结果 TRPC1 和TRPC6 在 HBZY-1 细胞中均有表达,主要定位在细胞膜和胞质.AngⅡ刺激后,可以激活 Gαq/PLCβ4/TRPC信号通路,表现为 Gαq、PLCβ4、TRPC1 和 TRPC6 的 mRNA 和蛋白表达均升高(P<0.05).细胞内的Ca2+内流增加(P<0.01),ECM沉积指标α-SMA、ColⅢ和 Fn的 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05).RNA干扰技术沉默TRPC1 和TRPC6 表达后,导致胞内Ca2+内流减少(P<0.05),HBZY-1 细胞ECM沉积指标的 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05).结果 表明,沉默TRPC表达可以抑制 AngⅡ诱导的 HBZY-1细胞 ECM沉积,且可能与减少[Ca2+]i 内流有关.结论 TRPC可能是肾脏纤维化新的治疗靶点.