Study on mechanism of action of Duhuo Jisheng Tang(独活寄生汤)in treatment of knee osteoarthritis in rats

目的:探讨独活寄生汤治疗大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制.方法:从66只大鼠中随机选取48只,采用改良Hulth法建立大鼠KOA模型,随机选择3只正常大鼠和3只建模大鼠进行鉴定.证实建模成功后,将剩余的15只正常大鼠纳入正常对照组,采用随机数字表将剩余的45只KOA模型大鼠分为KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组,每组15只.正常对照组、KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠均按每天10 mL·kg-1分别以0.9％生理盐水、0.9％生理盐水、独活寄生汤(浓度为0.93 g·mL-1)、盐酸氨基葡萄糖溶液(浓度为0.015 g·mL-1)灌胃,连续干预12周.12周后,切取大鼠双侧胫骨近端和股骨下端的软骨组织.采用实时定量PCR检测大鼠胫骨近端软骨组织中miR-675-3p、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)H19及聚集蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA的表达量,采用蛋白印迹法检测大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan、CollagenⅡ的蛋白表达量.结果:①大鼠饲养结果.KOA模型组大鼠因肺栓塞死亡2只,独活寄生汤治疗组大鼠因腹泻死亡1只,盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠因肺栓塞死亡1只.②大鼠胫骨近端软骨组织中KOA相关基因的RNA表达结果.正常对照组、KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中miR-675-3p、lncRNA H19、Aggrecan mRNA、CollagenⅡmRNA的表达量比较,组间差异均有统计学意义(F=83.050,P=0.000;F=436.003,P=0.000;F=129.212,P=0.000;F=135.844,P=0.000).KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中miR-675-3p、Aggrecan mRNA、CollagenⅡmRNA的表达量均低于正常对照组(miR-675-3p:P=0.000;P=0.003;P=0.002;Aggrecan mRNA:P=0.000;P=0.000;P=0.000;CollagenⅡmRNA:P=0.000;P=0.000;P=0.000);KOA模型组大鼠胫骨近端软骨组织中lncRNA H19的表达量低于正常对照组(P=0.002),独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中lncRNA H19的表达量与正常对照组比较,差异无统计学意义(P=0.058,P=0.069);独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中miR-675-3p、Aggrecan mRNA、CollagenⅡmR-NA的表达量均高于KOA模型组(miR-675-3p:P=0.000;P=0.000;Aggrecan mRNA:P=0.000;P=0.000;CollagenⅡmRNA:P=0.000;P=0.000);独活寄生汤治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中miR-675-3p、lncRNA H19、Aggrecan mRNA、CollagenⅡmR-NA的表达量与盐酸氨基葡萄糖治疗组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.922;P=0.778;P=0.857;P=0.904).③大鼠股骨远端软骨组织中软骨组成相关基因的蛋白表达结果.正常对照组、KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组的大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan和CollagenⅡ的蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(F=58.118,P=0.002;F=16.625,P=0.001).KOA模型组、独活寄生汤治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan的蛋白表达量均低于正常对照组(P=0.003;P=0.004),盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan的蛋白表达量与正常对照组相比,差异无统计学意义(P=0.078),KOA模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中CollagenⅡ的蛋白表达量均低于正常对照组(P=0.000;P=0.028;P=0.018),独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan和Colla-genⅡ的蛋白表达量均高于KOA模型组(Aggrecan:P=0.025;P=0.034;CollagenⅡ:P=0.003;P=0.004),独活寄生汤治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Aggrecan和CollagenⅡ的蛋白表达量与盐酸氨基葡萄糖治疗组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.999;P=0.775).结论:独活寄生汤治疗大鼠KOA的作用机制,可能与其能够上调miR-675-3p、lncRNA H19的表达进而促进Aggrecan、CollagenⅡ的表达有关.