新型冠状病毒RBD基因序列特征分析、原核表达及免疫原性研究

为了探究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白用于制备亚单位疫苗的免疫原性,试验对不同国家的15种SARS-CoV-2 RBD序列的同源性和保守域进行联合分析,预测RBD蛋白理化性质和结构特征,构建原核表达载体pET28a-RBD并对其进行PCR和双酶切鉴定,将原核表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中并进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE和Western-blot验证重组蛋白RBD的表达情况,再将小鼠分成单剂组、佐剂组、AL组和PBS组,免疫重组蛋白RBD后采用ELISA法检测血清中特异性抗体效价.结果表明:RBD蛋白在不同毒株间具有高度保守性,该蛋白质性质稳定;成功构建出原核表达载体pET28a-RBD,重组蛋白RBD在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,分子质量约为25 ku.免疫后第1周的单剂组和佐剂组特异性IgG抗体效价(166.70±21.08和116.70±16.67)显著或极显著高于AL组和PBS组(P＜0.05或P＜0.01);第2周佐剂组的IgG抗体效价(4 800.00±715.50)显著高于单剂组(2 667.00±337.30,P＜0.05),单剂组和佐剂组的IgG抗体效价均极显著高于AL组和PBS组(P＜0.01);单剂组和佐剂组第 1 周和第 2 周的 IgM 抗体效价(333.30±42.16,466.70±66.67 和 366.70±33.33,600.00±200.00)均极显著高于AL组和PBS组(P＜0.01).说明重组蛋白RBD有良好的免疫原性,可以作为SARS-CoV-2亚单位疫苗的候选蛋白.