口腔肿瘤干细胞样细胞中锌指蛋白750的潜在靶蛋白筛选

目的 筛选锌指蛋白750(ZNF750)在口腔肿瘤干细胞样细胞(CSC-like cell)中的潜在靶蛋白.方法 ①CSC-like cell的富集:采用肿瘤球形成实验富集口腔鳞癌(OSCC)细胞系TCA-83及CAL-27细胞中CSC-like cell细胞.② CSC-like cell细胞中ZNF750潜在靶蛋白筛选:将CSC-like cell分为oe-Con组(转导空载体慢病毒)及oe-ZNF750组(转导过表达ZNF750慢病毒),采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选两组差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析[GO、KEGG及IPR(结构域)分析],从差异表达蛋白中选择与ZNF750关系密切的候选蛋白[角鲨烯合酶(FDFT1)、与糖代谢相关的糖原合成酶(GYS1)、与核糖体相关的核糖体蛋白RPL15及40S核糖体蛋白RPS7以及具有结构分子活性的角蛋白6A、17(KRT6A、KRT17)]进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证.从与ZNF750关系密切的候选蛋白中选择FDFT1(与类固醇生物合成有关兼具酶转运活性)作为兴趣蛋白,采用qPCR检测CSC-like cell、口腔鳞癌(OSCC)细胞、正常口腔上皮细胞中FDFT1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中FDFT1蛋白相对表达量.结果 ①转导过表达ZNF750基因的 CSC-like cell细胞中差异表达蛋白的筛选结果:与oe-Con组相比,oe-ZNF750组中差异表达蛋白共26个,其中上调9个,下调17个.②差异表达蛋白生信分析结果及其中与ZNF750关系密切的差异表达蛋白验证结果:GO分析结果显示,差异表达蛋白主要位于细胞内和细胞内非膜结合细胞器,参与生物合成及生物大分子的合成过程;涉及的生物功能包含结构分子活性、糖原合成酶活性、糖脂转运及糖脂结合功能;KEGG 信号通路分析结果显示,差异表达蛋白显著富集在类固醇生物合成及糖代谢过程中;IPR分析证明富集的结构域包含糖脂转移蛋白结构域.qPCR结果显示,ZNF750可降低FDFT1、GYS1、RPL15、RPS7、KRT6A、KRT17基因的表达(P均＜0.05).③ CSC-like cell及过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中 FDFT1蛋白表达变化:与正常口腔上皮细胞比较,OSCC及CSC-like cell中FDFT1的表达上调,以CSC-like cell为著(P均＜0.05).分别与各自匹配的阴性对照组比较,过表达ZNF750的CSC-like cell中FDFT1蛋白表达下调,敲减ZNF750的CSC-like cell中FDFT1蛋白表达上调(P均＜0.05).结论 过表达ZNF750的CSC-like cell中差异表达蛋白共26个,其中上调9个、下调17个;差异表达蛋白主要与生物大分子合成及类固醇生物合成有关;FDFT1可能是ZNF750的潜在靶蛋白.