金冠豆角籽粒中α-淀粉酶抑制剂的纯化及抑制动力学的研究

目的 提取金冠豆角籽粒中α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)并将其进行纯化,研究其抑制类型及抑制效果.方法 以金冠豆角籽粒为原料,通过NaCl盐溶、(NH4)2SO4沉淀提取α-AI,使用G50、G75 葡聚糖凝胶柱进行层析,用 NaCl 洗脱液进行梯度洗脱,收集蛋白峰后,检测 α-AI 对猪胰淀粉酶的抑制活性;用Lineweaver-Burk双倒数绘图法和Michaelis-Menton方程分析酶反应动力学,探究α-AI的抑制类型.结果 金冠豆角籽粒中提取的 α-AI 蛋白含量为 1.72 mg/mL,对猪胰淀粉酶抑制率为 84.20％,半抑制浓度(semi-inhibition concentration,IC50)为(6.77±0.63)mg/mL.不添加抑制剂组和添加抑制剂组的α-淀粉酶的酶解曲线几乎相交于原点,并且酶最大反应速率(Vmax)随着抑制剂浓度的增大而减小,米氏常数(Km)几乎不变.结论 α-AI 与猪胰淀粉酶的结合呈现可逆型非竞争性抑制.