蛹虫草免疫调节蛋白分离纯化、结构表征与免疫调节活性研究

目的 探究蛹虫草蛋白质的免疫调节活性和一级结构.方法 通过碱溶酸沉法提取蛹虫草蛋白质,采用阴离子交换层析法和葡聚糖凝胶层析法对其进行分离纯化,通过建立小鼠巨噬细胞免疫调节模型对各组分进行活性评价,得到免疫活性最佳的组分,通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱法测得其分子量大小,通过蛋白质谱解析出其蛋白质一级结构.以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为阳性对照,通过小鼠巨噬细胞研究其对巨噬细胞RAW264.7 增殖活性、吞噬率、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)分泌量及免疫因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)释放量等的影响.结果 分离纯化出的蛹虫草免疫调节蛋白CMP 2b由 196个氨基酸组成,分子量为 22.460 kDa;CMP 2b可显著提高巨噬细胞的增殖能力和吞噬能力,细胞增殖率最高达到了空白对照组的(152.91±5.55)％,吞噬能力提高了 23.34％;CMP 2b 可促进巨噬细胞分泌 NO、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNF-α,其中NO分泌水平达到了空白对照组的 2.31 倍,ROS分泌水平达到阳性对照组LPS的 82.33％,TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-6 分泌量分别为空白对照组的 5.51、17.42、4.18 和 26.75 倍,显著增强了巨噬细胞免疫调节能力.结论 作为近年来兴起的一种优质珍稀食用菌,蛹虫草蛋白质在体外研究中显示出较强的免疫增强作用,可为蛹虫草作为免疫调节剂的开发提供新思路.