靶向新型冠状病毒棘突蛋白中独特B细胞抗原表位小鼠单克隆抗体的制备与应用

目的:制备靶向SARS-CoV-2棘突蛋白中独特B细胞抗原表位的小鼠单克隆抗体，并用于蛋白质免疫印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等多种方法。方法:利用传统的杂交瘤单克隆抗体技术，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其亚型。选取其中1株6H8体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔产生腹水，用蛋白A层析柱进行亲合纯化。将纯化抗体用于蛋白质免疫印迹、ELISA和IFA检测SARS-CoV-2棘突蛋白。结果:共获得5株单克隆杂交瘤细胞系，均为IgG2亚型。纯化的小鼠单克隆抗体6H8用于蛋白质免疫印迹仅特异性地识别重组表达的SARS-CoV-2棘突蛋白S1；用于ELISA能检测重组表达的SARS-CoV-2棘突蛋白的NTD区，实验孔吸光度值为3.824；用于IFA可特异性识别瞬间表达于HEK293细胞内的SARS-CoV-2棘突蛋白，而对瞬间表达于293T细胞内的SARS-CoV棘突蛋白则无交叉反应。结论:成功制备了一株靶向SARS-CoV-2棘突蛋白中独特B细胞抗原表位的小鼠单克隆抗体，为SARS-CoV-2抗原检测提供了有效工具。