125I标记外泌体在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布研究

目的 旨在开发用125I-NaI标记外泌体的方法,并通过γ计数仪考察其在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布特征.方法 通过非放射性NaI对用于治疗胰腺癌的工程化外泌体进行冷标记,采用透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析和Western blotting实验对标记前后外泌体进行表征.在此基础上采用Iodogen法进行外泌体的放射性125I-NaI标记,分离纯化后测定125I-NaI的标记率,Radio-HPLC法测定给药前后125I-外泌体的放化纯度以考察其稳定性;将125I-外泌体单次尾iv于Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内,分别于给药后2、6、24、72h(每个时间点雌雄各3只)经CO2麻醉后心脏放血处死小鼠,取血清、主要组织器官及肿瘤,γ计数仪测量其放射性计数,计算各组织/血清在不同时间点的蛋白沉淀率;并计算在不同时间点的每克组织(或每毫升血清)放射性计数占总注入放射性计数的百分比(％ID·g-1或％ID·mL-1).结果 外泌体表征的结果显示,标记前后的外泌体形态一致,均成圆形或茶托样结构;标记前外泌体粒径峰值为113 nm,标记后外泌体粒径峰值为122 nm,粒径大小主要分布在50～200nm;均表达其标志性蛋白CD63及TSG101,符合外泌体特征.125I-NaI标记外泌体的标记率为27.82％,纯化后HPLC法测得即时放化纯度为100％,给药后放化纯度为(93.34±5.48)％.在小鼠尾iv给药后2h,标记的外泌体主要分布在肝脏[(10.899 2±1.518 1)％ID·g-1]和脾脏[(2.5664±0.7998)％ID·g-1],肿瘤中为[(0.291 0± 0.0560)％ID·g1],脑、心脏、脂肪和肌肉组织摄取较少;给药后72h,肝脏中仍有较高摄取,肿瘤中仍有放射性分布.给药后2～6h各组织脏器的蛋白沉淀率较低,表明125I-NaI标记外泌体稳定性有所降低.结论 外泌体可以进行125I标记,而且标记同位素前后对外泌体物理形态、生物学活性无明显影响;125I标记外泌体的方法简便,标记率和放化纯度均较高;该外泌体产品在荷瘤小鼠体内大部分血流丰富的组织器官均有分布,且具有一定的肿瘤靶向定位能力.