丹参酮ⅡA激活PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导小鼠耳蜗血管纹周细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA是否能抑制高糖诱导的小鼠耳蜗血管纹周细胞的凋亡及可能机制，为治疗糖尿病性听力损失提供参考。方法:C57BL/6J雄性小鼠40只，分为对照组、糖尿病（DM）组、糖尿病+丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA组，每组10只。制备2型糖尿病模型。将原代周细胞分为对照组、高糖（HG）组、HG+丹参酮ⅡA（1、3、5 μmol/L）组、HG+丹参酮ⅡA+LY294002（PI3K/AKT通路抑制剂）组、LY294002组、丹参酮ⅡA组、二甲基亚砜（DMSO）组。ABR检测听力阈值；硫代巴比妥酸试验（thiobarbituric acid，TBA）检测耳蜗氧化应激水平；苏木精-伊红染色（HE）观察耳蜗血管纹形态变化；Evans blue检测耳蜗血管纹血迷路屏障通透性；免疫荧光观察耳蜗血管纹周细胞凋亡蛋白的表达；流式细胞术检测周细胞凋亡率；DCFH-DA结合流式细胞术检测周细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量，免疫蛋白印记（Western Blot，WB）法检测周细胞凋亡蛋白（Cleaved-caspase3、Bax）、抗凋亡蛋白（BCL-2）以及通路蛋白（PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的表达。采用 SPSS软件进行统计分析，行独立样本 t检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:动物实验：丹参酮ⅡA可降低DM组［（35.0±3.5）dB SPL比（55.3±8.1）dB SPL］听力阈值（ t=4.899， P<0.01），降低耳蜗内氧化应激水平（ t=4.384， P<0.05），改善耳蜗血管纹结构紊乱、萎缩，空泡增多的现象。丹参酮ⅡA可缓解DM小鼠耳蜗血管纹血迷路屏障通透性［Evans blue渗漏（6.84±0.27）AU比（8.59±0.85）AU］增加的现象（ t=2.770， P<0.05），可逆转周细胞凋亡蛋白Cleaved-caspase3（ t=4.956， P<0.01）和 Bax（ t=4.388， P<0.05）的表达。细胞实验：丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞内ROS含量，且呈浓度依赖性（ t=3.569， P<0.05； t=4.772， P<0.01； t=7.494， P<0.01）；丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞凋亡率和凋亡蛋白，增加抗凋亡蛋白、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的表达，且均呈浓度依赖性（ P值均<0.05）；LY294002可逆转丹参酮ⅡA对周细胞凋亡的保护作用（ P值均<0.05）。 结论:丹参酮ⅡA可通过降低高糖环境下的氧化应激水平以及激活PI3K/AKT信号通路，抑制高糖诱导的小鼠耳蜗血管纹周细胞凋亡，从而发挥对糖尿病性听力损失的保护作用。