基于碳点内滤效应快速检测鲜牛奶中碱性磷酸酶活性的荧光分析方法的构建

研究建立一种以氮掺杂碳点(Nitrogen-carbon dots,N-CDs)为荧光探针,可快速、准确、灵敏检测鲜牛奶中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的荧光分析方法.采用水热法,用乙二胺为氮源和邻苯二酚为碳源制备一种绿色荧光N-CDs,并采用透射电子显微镜(TEM)、紫外可见吸收光谱(UV-vis)、X射线电子能谱(XPS)和傅里叶红外光谱(FT-IR),对所合成的材料表面形貌、表面基团及光吸收特性进行表征,并通过对照试验对利用N-CDs构建检测ALP荧光分析方法的可行性进行验证.以检测体系中工作缓冲液的pH、底物硝基苯磷酸二钠(Disodium p-nitrophenyl phosphate,PNPP)的浓度、酶促反应时间为单因素,优化检测ALP的最佳条件,并建立相应的标准曲线.结果表明,材料表征结果也与以往报道的相符,N-CDs合成成功.最佳工作缓冲液为Tris-HCl(20 mmol/L,pH10),最佳PNPP浓度为 1 mmol/L,最佳酶促反应时间为 50 min.在最优条件下,ALP的活性浓度与 N-CDs的荧光强度变化建立良好的线性关系,线性回归方程为:Y=15397.05X+70344.46(R2=0.995),线性范围在 0.01～25 U/L,检测限(LOD)为 0.001 U/L(S/N=3).在两种鲜牛奶中添加回收率在100.1%～107.2%之间,变异系数小于 14.3%,表明该方法具有较好的准确性和可靠性.本研究为鲜牛奶中ALP的检测提供了一种准确高效的方法.