甘草养阴汤联合甲氨蝶呤干预老年类风湿关节炎小鼠价值及基于DIA蛋白组学分析的效应机制

目的 探讨老年类风湿关节炎(ERA)小鼠的分泌表型特点及甘草养阴汤联合甲氨蝶呤对ERA小鼠的干预作用和整体效应机制.方法 DBA/1 雄性小鼠共72 只,随机取10 只作为正常组;另取12 只建立胶原诱导关节炎(CIA)模型,作为RA组;剩余50 只小鼠在CIA模型基础上加D-半乳糖刺激建立ERA模型,将造模成功小鼠随机分为ERA组、甲氨蝶呤组、甘草养阴汤组、甲氨蝶呤+甘草养阴汤组.正常组、RA组、ERA组小鼠给予生理盐水灌胃,每日1 次;甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤1 mg/kg灌胃,每周2 次;甘草养阴汤组给予甘草养阴汤3.0 g/kg灌胃,每日1 次;甲氨蝶呤+甘草养阴汤组给予甲氨蝶呤和甘草养阴汤灌胃,药物用量及方法同甲氨蝶呤组和甘草养阴汤组.各组均灌胃4 周.对各组小鼠后肢关节炎病变进行评分,HE染色观察各组踝关节组织水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀、血管翳形成、脂肪沉积情况并进行评分,采用非依赖采集(DIA)蛋白组学技术分析各组小鼠的分泌表型特点.结果 ERA组后肢肿胀更明显,关节炎评分及肢关节水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀评分均明显高于RA组(P均<0.05),血管翳形成及脂肪沉积评分与RA组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);甘草养阴汤组、甲氨蝶呤+甘草养阴汤组关节炎评分及关节水肿、软骨/骨侵蚀、脂肪沉积评分均明显低于ERA组(P均<0.05),甲氨蝶呤组关节炎评分及关节水肿、滑膜增生、软骨/骨侵蚀、血管翳形成、脂肪沉积评分与ERA组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).ERA组与RA组比较,上调71 个蛋白,下调70 个蛋白,主要富集于中性粒细胞胞外陷阱形成、脂质和动脉粥样硬化、鞘脂信号通路等.甲氨蝶呤+甘草养阴汤除了对多种炎症因子的抑制作用,还倾向于对脂质代谢等通路靶点的调节,尤其是上调叶酸合成通路相关靶点.结论 ERA小鼠的代谢改变可能导致更为严重的关节损伤,甘草养阴汤对甲氨蝶呤治疗ERA具有减毒增效作用.