周期蛋白依赖性激酶-5抑制肽通过上调神经生长因子缓解高糖环境对人肾足细胞凋亡的影响

目的 探究截短型周期蛋白依赖性激酶 5(Cdk5)抑制肽(TFP5)对高糖(HG)条件下人肾足细胞损伤和凋亡的影响,及其作用机制.方法 将人肾足细胞分为低糖组(LG,1.0 g·L-1)、HG组(4.5 g·L-1)、HG+Scramble组(4.5 g·L-1+100.0 nmol·L-1)、HG+TFP5 组(4.5 g·L-1+100.0 nmol·L-1)和HG+联合组(4.5 g·L-1+50.0 ng·mL-1 K252a+100.0 nmol·L-1 TFP5).用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞凋亡基因和神经生长因子(NGF)及Cdk5的表达水平,用荧光红染料法和DCFH探针法分别检测H2O2和活性氧(ROS)的水平,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况.结果 LG组和HG组的B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA 分别为(0.04±0.02)×10-2 和(0.09±0.01)×10-3,Cdk5 mRNA分别为(0.04±0.01)×10-1 和(0.07±0.01)×10-1,细胞凋亡比率分别为(1.61±0.25)%和(3.77±0.17)%,H2O2 分别为 0.56±0.27 和 2.94±1.15,ROS分别为 0.51±0.28 和 1.04±0.07,Cdk5 酶活力分别为0.14±0.06 和2.11±0.02,差异均有统计学意义(均P＜0.01).LG组、HG+Scramble组和HG+TFP5 组的H2 O2 分别为 1.13±0.20、2.49±0.38 和 1.08±0.18,ROS 分别为0.87±0.18、2.61±0.71 和 0.83±0.22,Bcl-2 mRNA分别为(0.07±0.02)×10-2、(0.01±0.03)×10-2 和(0.04±0.06)×10-2,NGF mRNA 分别为(0.15±0.53)×10-1、0.04±0.06×10-1 和 0.22±0.08×10-2.HG+Scramble组的上述指标和HG+TFP5 组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).HG+Scramble组、HG+TFP5 组和联合组的 NGF mRNA 分别为0.04±0.01×10-1、0.05±0.01×10-1 和0.01±0.03×10-1,Bcl-2 mRNA分别为(0.05±0.03)×10-2、(0.01±0.00)×10-1 和(0.03±0.02)×10-2,NGF 蛋白相对表达水平分别为 1.14±0.07、1.69±0.44 和0.48±0.06,HG+TFP5 组的上述指标和联合组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 TFP5 可通过Cdk5-NGF调控轴显著降低HG培养条件下人肾足细胞内的氧化应激压力和细胞凋亡.