丹皮酚对大脑中动脉缺血模型小鼠行为功能障碍的改善作用研究

背景 中风是严重危害人体健康的心脑血管系统疾病之一,具有高患病率、高致残率和高致死率的特征.牡丹皮是毛茛科植物牡丹干燥根皮,具有清热凉血、活血化瘀之功效.丹皮酚是牡丹皮的主要活性成分,已有研究证实在缺糖缺氧条件下,丹皮酚对神经元有一定保护作用.目的 观察丹皮酚对大脑中动脉缺血(MCAO)模型小鼠的干预效果,探究丹皮酚溶液灌胃在治疗中风行为功能障碍的神经生物学机制.方法 本研究时间为2019年12月-2021年12月.缺血性中风模型的建立与评价:将20只SPF级雄性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分成假手术组(n=10)、模型组(MCAO组,n=10),采用线栓法制成小鼠MCAO模型,造模24 h后,通过Longa评分评价各组小鼠神经功能受损情况;激光散斑血流成像系统监测各组小鼠在MCAO术后大脑血流改变状况;对MCAO术后的小鼠进行TTC染色,在病理上观察小鼠大脑的损伤情况.探究丹皮酚对MCAO小鼠的行为功能保护作用:将50只SPF级、雄性C57BL/6小鼠进行随机分组:假手术组(n=10)、模型+玉米油组(n=20)、模型+丹皮酚组(n=20).造模后24 h,验证模型稳定后,模型+丹皮酚组用丹皮酚玉米油溶液灌胃,给药浓度为100 mg·kg-1·d-1,其余组灌服等量玉米油.在造模28 d后,统计三组小鼠的存活情况,绘制生存曲线;使用Longa评分判断小鼠神经功能恢复情况;尼氏染色法检测小鼠大脑梗死面积;行为学测试小鼠在造模前及造模后7、14、21、28 d 5个时间点的运动感觉功能改变.探究丹皮酚对MCAO小鼠行为功能改善的机制:随机将30只SPF级、雄性C57BL/6小鼠分成假手术组(n=6)、模型+玉米油组(n=12)、模型+丹皮酚组(n=12).造模后24 h,验证模型稳定后,药物组用丹皮酚玉米油溶液灌胃,给药浓度为100 mg·kg-1·d-1,其余组灌服等量玉米油.造模后2 d,用Western blotting法测定小鼠大脑纹状体白介素1 β(IL-1 β)蛋白表达情况,探究急性期内丹皮酚是否能降低大脑炎性反应;造模后14 d,采用免疫荧光法检测小鼠大脑半暗带离子钙结合衔接分子1(IBA1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 模型+玉米油组小鼠干预28 d的生存率为66.47％,丹皮酚组小鼠生存率为81.43％.Log-rank检验结果显示,三组小鼠干预28 d的生存曲线比较,差异有统计学意义(x2=1.436,P＜0.05).造模28 d后,模型+丹皮酚组Longa评分低于模型+玉米油组(P＜0.05).三组小鼠造模后14 d脑组织中IBA1、GFAP表达水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05);模型+玉米油组、模型+丹皮酚组小鼠造模后14 d脑组织中IBA1、GFAP表达水平高于假手术组(P＜0.05);模型+丹皮酚组小鼠造模后14 d脑组织中IBA1、GFAP表达水平低于模型+玉米油组(P＜0.05).模型+玉米油组小鼠造模后2 d纹状体IL-1 β蛋白表达水平高于假手术组(P＜0.05);模型+丹皮酚组小鼠造模后2 d纹状体IL-1β蛋白表达水平低于模型+玉米油组(P＜0.05).结论 丹皮酚可控制MCAO模型中小鼠在急性阶段的发症反应,减少了小鼠急性脑梗死面积,延长了小鼠生存期、改善了其运动感觉功能.