丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的 利用脂多糖(LPS)刺激BV2小胶质细胞构建体外神经炎症模型,探讨丹酚酸A(SalA)对神经炎症的抑制作用及机制.方法 ①BV2细胞分为细胞对照组(正常培养24 h)、LPS(1 mg·L-1孵育24 h)组、SalA(0.01,0.05,0.5,5,10和20 μmol·L-1培养24 h)组和LPS+SalA(加入LPS 1 mg·L-1及SalA 0.01,0.05,0.5,5,10和20 μmol·L-1共同培养24 h)组,MTT法检测细胞存活率.② 除LPS+SalA组SalA给药浓度为0.05,0.5和5 μmol·L-1外,其他分组处理同方法①.Griess法检测BV2细胞一氧化氮(NO)分泌水平,ELISA检测BV2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α,IL-1β 和IL-6 mRNA表达水平,Western印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平及NF-κB P65和NF-κB抑制因子α(IκBα)的磷酸化水平,免疫荧光法检测iNOS蛋白表达及NF-κB P65的核转位.结果 ① 与细胞对照组相比,LPS 1 mg·L-1和SalA 0.01～20 μmol·L-1对BV2细胞存活率无显著影响.② 与细胞对照组相比,LPS 1 mg·L-1组NO分泌水平显著升高(P＜0.01),TNF-α,IL-1β 和IL-6分泌及mRNA表达水平显著上升(P＜0.01),iNOS表达水平及NF-κB P65和IκBα 磷酸化水平显著升高(P＜0.01),且iNOS和NF-κB P65蛋白免疫荧光强度显著升高(P＜0.01);与LPS 1 mg·L-1组相比,SalA 5 μmol·L-1可使NO表达水平显著降低(P＜0.01),TNF-α,IL-1β 和IL-6分泌及mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).SalA 0.5和5 μmol·L-1可使iNOS表达水平及NF-κB P65和IκBα 磷酸化水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),且iNOS和NF-κB P65蛋白免疫荧光强度明显降低(P＜0.01).结论 SalA通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS刺激引起的BV2细胞炎症反应.