In-cell Western法测定人胰岛素生物学活性

目的:利用in-cell Western(ICW)技术研究基于转基因细胞的人胰岛素生物学活性测定方法.方法:以CHO-INSR B1284 为靶细胞,用不同浓度的人胰岛素刺激靶细胞,采用ICW技术检测人胰岛素受体酪氨酸磷酸化水平,进行人胰岛素的体外生物学活性测定;根据《中华人民共和国药典》2020 年版通则9401"生物制品生物活性/效价测定方法"对该方法进行专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围等方法学验证;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,采用本方法测定人胰岛素原料药及其他人胰岛素类似物的生物学活性相对效价.结果:不同浓度的人胰岛素作用于CHO-INSR B1284 细胞后具有较好的剂量依赖性;5 个效价浓度的待测品经8 次测定,相对效价的几何均值分别为:(63.76±4.38)％,(78.01±5.97)％,(99.52±4.62)％,(122.84±7.4)％,(151.71±8.81)％,相对偏倚均在±5％范围内,对应的几何变异系数(GCV,％)均<11％,GCV的置信上限均<20％;采用该方法能有效检测人胰岛素及其胰岛素类似物的效价.结论:利用ICW技术的人胰岛素体外生物学活性测定法专属性强、准确度高、精密度好,可作为人胰岛素生物学活性的常规检测方法.