姜黄素对玉米赤霉烯酮诱导的猪肾上皮细胞凋亡的保护作用

为探究姜黄素(Cur)对玉米赤霉烯酮(ZEA)诱导的猪肾上皮细胞(PK-15)凋亡的影响及其可能的保护机制,体外培养PK-15细胞,给予玉米赤霉烯酮和不同浓度姜黄素(6.25、12.5、25 μmol/L)处理24 h,通过MTT法测定姜黄素和ZEA对PK-15细胞活力的影响;荧光显微镜观察Hoechst 33342活细胞染色判断细胞凋亡情况;JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化;试剂盒检测细胞上清液中LDH活性;实时荧光定量PCR测定细胞中的Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA表达水平;Western blot测定Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果表明,浓度在25 μmol/L以下的姜黄素对PK-15细胞几乎没有毒性,ZEA的半数抑制浓度(IC50)为36.55 μg/mL;姜黄素极显著提高ZEA降低的PK-15细胞活力(P＜0.01),缓解ZEA引起的细胞凋亡,极显著降低ZEA诱导的LDH活性(P＜0.01),显著降低ZEA引起的线粒体膜电位丢失(P＜0.01);ZEA极显著(P＜0.01)升高细胞中Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达,极显著(P＜0.01)降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达;与ZEA组比较,+Cur6.25组的Bax mRNA表达量和Bax、Caspase-3蛋白表达均极显著(P＜0.01)降低,Bcl-2的蛋白表达极显著(P＜0.01)降低,+Cur12.5组显著降低了Bax和Caspase-3的mRNA表达(P＜0.05),极显著(P＜0.01)降低Bax和Caspase-3的蛋白表达,极显著升高了Bcl-2的mRNA表达和蛋白表达(P＜0.01),+Cur25组的Bcl-2的mRNA表达量和蛋白表达量极显著(P＜0.01)的升高,Caspase-3的mRNA表达和蛋白表达极显著(P＜0.01)降低.本研究表明ZEA诱导PK-15细胞发生凋亡,姜黄素可通过抑制线粒体凋亡途径减轻其诱导的细胞凋亡,从而起到保护作用提高细胞活力.