Protective Effect of Yiqi Tongluo Decoction(益气通络方)Medicated Serum on Oxidative Stress Injury Model of PC 12 Cells by Attenuating Oxidative Stress and Activating PI3K/AKT Pathway

目的 研究益气通络方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法 ①选取SPF级健康SD雌性大鼠20只,随机分为空白组及益气通络方组.分别使用生理盐水及益气通络方灌胃7d,后腹主动脉取血离心制备空白血清及含药血清.②体外培养PC12细胞,随机分为正常组、模型组、空白血清组、益气通络方含药血清组、PI3K抑制剂组、益气通络方含药血清+PI3K抑制剂组.除正常组外,H2O2体外诱导构建PC12细胞氧化应激损伤模型.试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及活性氧(ROS)分布水平.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平.结果 选择600 μmol/L H2O2刺激4 h作为氧化损伤造模条件.①与正常组相比,模型组LDH、MDA含量增高(P＜0.01),SOD活力降低(P＜0.01),ROS细胞内分布增加.与模型组相比,益气通络方含药血清组LDH、MDA含量降低(P＜0.05),SOD活力增高(P＜0.01),ROS细胞内分布减少.②与正常组相比,模型组p-PI3K、p-AKT/AKT降低(P＜0.01),Bax/Bcl-2增高(P＜0.01).与模型组相比,益气通络方含药血清组p-PI3K、p-AKT/AKT增高(P＜0.01),益气通络方含药血清能下调Bax/Bcl-2.与益气通络方含药血清组相比,加入PI3K抑制剂会显著抑制p-P13K、p-AKT表达(P＜0.01),增高Bax/Bcl-2,促进细胞凋亡.结论 益气通络方能减轻氧化应激反应,上调PI3K/AKT信号通路,促进抗凋亡蛋白表达,抑制细胞凋亡途径,发挥细胞保护作用.