归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障

目的:探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用.方法:将密度为1×107个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液,经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL,构建胃癌荷瘤小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为5组,模型组、奥沙利铂组(10 mg-kg1)、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg-1),每组10只,另外余10只作为空白组.各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水,治疗14 d.末次给药后,次日眼球取血分离血清并取其结肠样本.苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化.酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4mRNA及蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组黏膜下层水肿,黏膜层中肠腺排列紊乱,杯状细胞缺失,可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象.而各给药组均有不同程度的改善;与正常组比较,模型组血清中DAO和D-LA水平均显著上升(P＜0.01),与模型组比较,联合用药高剂量组DAO和D-LA水平及联合用药中剂量组D-LA水平均有所下降(P＜0.05,P＜0.01),与奥沙利铂组比较,联合用药高、中剂量组D-LA水平有所下降(P＜0.05),其余组DAO和D-LA表达水平也有所下降,但差异无统计学意义;与正常组比较,模型组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平均有所升高,其中联合用药高剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),联合用药中剂量组cAMP蛋白表达水平升高(P＜0.05);与奥沙利铂组比较,联合用药高剂量组cAMP蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),其余组mRNA及蛋白表达也有所升高,但差异无统计学意义.结论:归芪白术方联合奥沙利铂通过VIP/cAMP/PKA信号通路调节AQP3和AQP4达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用.