基于磷酸二酯酶抑制活性的清金化痰汤抗炎活性评价方法建立

目的:基于磷酸二酯酶(PDE)抑制活性,建立清金化痰汤抗炎活性测定方法,补充与完善该经典名方的质量控制体系.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)建立PDE活性测定方法,考察清金化痰汤抑制PDE活性的量效关系,流动相甲醇-0.5％乙酸水溶液(5:95),检测波长254 nm.通过测定多批清金化痰汤水提物冻干粉对PDE的抑制率,以中和酶的活性国际单位U标示其生物活性.结果:选择4U·mL-1 PDE溶液,在反应底物环磷酸腺苷(cAMP)浓度为50 μmol·L-1、反应时间为60 min时,酶促反应稳定.在此反应体系下,当清金化痰汤水提物冻干粉终质量浓度为0.11～3.0 g·L-1时,其对PDE的抑制作用呈现浓度依赖性.确定清金化痰汤水提物冻干粉待检质量浓度1 g·L-1,在该质量浓度下对PDE呈显著且稳定抑制作用,抑制率＞45％,即1 mg的清金化痰汤水提物冻干粉至少可中和1.8UPDE的活性.结论:建立了基于PDE抑制活性的清金化痰汤生物活性评价方法,以PDE活性国际单位U表征了清金化痰汤的抗炎活性,可为中药复方生物活性测定研究提供新方法.