抗SARS-CoV-2 S蛋白IgM单克隆抗体的表达及鉴定

为了寻求SARS-CoV-2 IgM抗体阳性血清质控品的替代品,本研究成功表达纯化出抗SARS-CoV-2 S蛋白IgM单克隆抗体.研究确定了 IgM单克隆抗体最佳表达载体为含增强子sp163和信号肽2的组合以及第5d为目的蛋白收获的最佳时间.此外在研究J链的作用时发现转染细胞时不添加J链(nCoV-163-IgM3)的表达量明显高于添加J链(nCoV-163-IgM3 J)时的表达量,J链对蛋白稳定性也无明显影响,且nCoV-163-IgM3和nCoV-163-IgM3 J抗原结合活性之间的差别无统计学意义(P＞0.05),nCoV-163-IgM3和nCoV-163-1gM3 J对本研究所检测的WT-S1、Alpha-S1、Beta-S1、Delta-S1、Omicron-S1、BA.2-S1、BF.7-RBD、XBB.1-S1、BQ1.1-S1 等九种抗原均有结合活性,只有一株(BA.2.75-RBD)逃逸.纯化后的目的蛋白经还原剂(β-ME)还原后显示重链分子量大小为70kD左右,轻链分子量大小为25kD左右.目的蛋白均可与新型冠状病毒抗体检测试剂盒(胶体金,INNOVITA)、SARS-CoV-2 S蛋白IgM抗体酶联免疫吸附测定试剂盒(Elabscience)、抗SARS-CoV-2 S-RBD蛋白人IgM抗体酶联免疫吸附测定试剂盒(Proteintech)等三种试剂盒反应.