应用TaqMan-MGB探针RT-qPCR技术对青海省海南州鼠疫菌耐链霉素rpsL基因突变位点的检测

目的 研究青海省海南藏族自治州(海南州)鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)对链霉素的敏感性,以便在突发鼠疫疫情中能精准地指导鼠疫临床用药.方法 根据鼠疫菌基因序列设计特异性引物,以S19960127菌株核糖体蛋白S12编码基因(rpsL基因)突变位点和野生型鼠疫菌株rpsL基因位点分别设计探针,利用TaqMan-MGB探针技术对海南州1954-2009年分离的87株鼠疫菌进行耐链霉素rpsL基因突变位点检测.结果 87株被试菌株的野生型A碱基的羧基荧光素(FAM)探针检测结果均为阳 性,每个反应管内荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(Ct)值在18.74～21.93,相对荧光单位(RFU)峰值＞2 000;S19960127的Ct值为25.42,RFU峰值＜200;阴性对照RFU峰值＜200.所有被试菌株突变型G碱基的亚磷酰胺(VIC)探针检测结果均为阴性,Ct值在20.04～24.79,RFU峰值＜200;S19960127的Ct值为17.56,RFU峰值＞1 000;阴性对照RFU峰值＜200.实验结果显示海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌基因序列第128位的碱基未发生A→G突变,该疫源地未检出耐链霉素鼠疫菌株.结论 海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌对链霉素均敏感.鉴于细菌耐药性基因的产生与传播特征,应持续开展监测并建立鼠疫菌耐药性监测网络,以便能及时发现并控制耐药菌的传播.