雷帕霉素诱导自噬抑制大鼠尿道损伤后纤维化的作用机制研究

目的 探究雷帕霉素(Rapa)对大鼠尿道狭窄形成和成纤维细胞的影响及其作用机制.方法 构建大鼠尿道狭窄模型(SD雄性大鼠,体质量250～300 g),采用随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和Rapa组,每组10只.术后14 d取大鼠尿道组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化;免疫组化法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.将HLF-1细胞分为对照组,Rapa组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+Rapa组.应用transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞的周期和凋亡情况,Western blotting检测LC3的表达.结果 HE染色发现Rapa组大鼠尿道组织狭窄程度较阳性对照组明显减轻,Masson及免疫组化染色结果显示,阳性对照组和Rapa组大鼠损伤尿道组织中胶原和α-SMA表达均较阴性对照组大鼠增加,但Rapa组胶原和α-SMA表达显著低于阳性对照组.与对照组相比,Rapa组HLF-1细胞迁移、侵袭能力逐渐减弱,呈剂量依赖关系(均P＜0.05),而加入3-MA干预后,Rapa对HLF-1迁移、侵袭和能力的抑制作用减弱(均P＜0.05).流式细胞术及Western blotting结果显示,与对照组相比,Rapa组细胞凋亡明显增加(均P＜0.05),且细胞LC3表达呈剂量依赖性增多(均P＜0.05).结论 雷帕霉素可以缓解大鼠尿道组织损伤后纤维化,并抑制HLF-1细胞迁移和侵袭能力,诱导HLF-1细胞的凋亡,其效应可能是通过诱导细胞自噬来实现的.