miR-410-3p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的 探讨微小RNA-410-3p(miR-410-3p)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 取对数生长期OS细胞系MG63、U2-OS、OS187及健康人成骨细胞hFOB1.19,采用多重实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和Western blot和检测miR-410-3p趋化素样因子超家族成员3(CMTM3)的表达;选取64例OS患者的OS组织及瘤旁组织标本,收集患者的一般临床资料和临床病理指标(性别、年龄、肿瘤大小、Enneking分期及淋巴结转移),分析2种组织标本中miR-410-3p、CMTM3与患者临床病理指标的关系;采用qPCR和West-ern blot检测2种组织中miR-410-3p和CMTM3蛋白表达.采用starBase软件结合双萤光素酶报告实验分析miR-410-3p和CMTM3的靶向关系;MG63细胞分为anti-miR-410-3p组(转染anti-miR-410-3p)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、NC组(空白对照)、pcDNA-CMTM3组(转染pcDNA-CMTM3)、pcDNA组(转染pcDNA)、an-ti-miR-410-3p+si-con组(共转染anti-miR-410-3p与si-con)、anti-miR-410-3p+si-CMTM3组(共转染anti-miR-410-3p与si-CMTM3),qPCR检测各组MG63细胞miR-410-3p和CMTM3 mRNA表达,四甲基偶氮唑(MTT)法和流式细胞术分别检测各组MG63细胞的增殖与凋亡情况,Western blot检测CMTM3、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与瘤旁组织比较,OS组织中miR-410-3p表达量增加,CMTM3 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05);miR-410-3p和CMTM3与肿瘤Enneking分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05);与健康人成骨细胞hFOB1.19细胞比较,OS细胞系MG63、U2-OS及OS187中的miR-410-3p表达量增加(P<0.05),CMTM3 mRNA和蛋白表达量减少(P<0.05);与miR-con组比较,miR-410-3p可降低WT-CMTM3萤光素酶相对活性(P<0.05),但对MUT-CMTM3萤光素酶相对活性无影响(P>0.05);与anti-miR-con组比较,anti-miR-410-3p组MG63细胞48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达量增加(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-CMTM3组MG63细胞48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达量增加(P<0.05);与anti-miR-410-3p+si-con组比较,anti-miR-410-3p和si-CMTM3组MG63细胞48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平增加(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05).结论 miR-410-3p通过靶向CMTM3表达可促进OS细胞增殖和抑制细胞凋亡.