miR-129靶向HMGB1对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应的影响

目的 探讨微小RNA-129(mini RNA-129,miR-129)对大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)后炎症反应的影响及其机制.方法 实验分为正常组、假手术组、模型组、miR-NC(阴性)组、miR-129 agomir(激动剂)组,每组 12 只.对各组大鼠进行BBB脊髓运动功能评分;通过H-E染色进行脊髓组织形态学观察;通过免疫荧光染色观察A1 型星形胶质细胞;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 miR-129 和靶基因高迁移率族蛋白 B1(high mobility group box 1,HMGB1)mRNA的表达;通过蛋白质免疫印迹技术(western blot,WB)检测HMGB1 蛋白表达;通过酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6 表达水平;通过双荧光素酶法检测miR-129 和HMGB1 靶向关系,实验分为四组:pMIR-HMGB1-WT+miR-129 mimics组、pMIR-HMGB1-WT+miR-NC组、pMIR-HMGB1-MUT+miR-129 mimics组、pMIR-HMGB1-MUT+miR-NC组.结果 与正常组相比,假手术组miR-129 表达、HMGB1mRNA和蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 水平以及A1 型星形胶质细胞水平差异无统计学意义(P>0.05);模型组miR-129 的表达显著降低,HMGB1mRNA和蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6 水平以及 A1 型星形胶质细胞水平均显著升高(P<0.05).与模型组相比,miR-129NC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);miR-129 agomir组miR-129 的表达显著升高,HMGB1mRNA和蛋白表达、TNF-α、IL-1β和IL-6 水平以及A1 型星形胶质细胞水平均显著降低(P<0.05).与pMIR-HMGB1-WT+miR-NC组相比,pMIR-HMGB1-WT+miR-129 组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);pMIR-HMGB1-MUT+miR-129 组和pMIR-HMGB1-MUT+miR-NC组之间无明显差异(P>0.05).结论 miR-129 可靶向调控HMGB1,下调炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6 水平,减轻大鼠ASCI发生后的炎症反应.