基于Nrf2/ARE信号通路研究芪黄补肾泄浊方对糖尿病肾病HMC细胞的保护机制

目的:探讨芪黄补肾泄浊方对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件信号通路表达的影响及其对氧化应激的保护作用.方法:离体培养HMC,制备正常大鼠血清,大鼠灌胃给予厄贝沙坦及芪黄补肾泄浊方,达到血药浓度后制备含药血清,实验分为对照组、高糖组、厄贝沙坦组及芪黄补肾泄浊方组.对照组HMC给予正常大鼠血清(10％血清浓度)培养液培养,高糖组HMC予大鼠血清(10％血清浓度)的高糖培养液培养,厄贝沙坦组与芪黄补肾泄浊方组分别给予10％剂量厄贝沙坦与10％剂量芪黄补肾泄浊方含药血清高糖培养液干预培养,培养48 h后收集相关指标检测.采用Real?time PCR定量分析的方法检测各组HMC中核因子E2相关因子(Nrf2)、γ?谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、超氧化物歧化酶(SOD)的mRNA表达水平.免疫细胞化学法检测各组HMC中γ?GCS和SOD的表达;采用Western blot的方法观察各组HMC中γ?GCS、SOD蛋白表达的情况.结果:各组实验细胞Nrf2、γ-GCS、SOD mRNA、蛋白的表达,在对照组中只有少量,高糖组较对照组减少(P<0.05),厄贝沙坦与芪黄补肾泄浊方干预后增加,且以芪黄补肾泄浊方组增加更显著(P<0.05).结论:芪黄补肾泄浊方可改善高糖培养下HMC氧化应激损伤,其作用机制可能是通过激活Nrf2及其相关下游蛋白γ?GCS和SOD达到的.