孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制.方法 (1)按照孕激素醋酸甲羟孕酮(MPA)药物浓度梯度(0.1、1、10、50、100μmol/L)培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24h、48 h、72 h后,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8检测细胞存活率,确定IC50;Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率.(2)将细胞分为H0-8910细胞4组:(1)NC组;(2)孕激素组;(3)孕激素+si-HOXA9组;(4)孕激素+ov-HOXA9组.H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR和Western blot分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin,N-cadherin,E-cadherin)的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验用于检测细胞侵袭能力.结果 (1)孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制(P＜0.0001),且细胞凋亡率上升(P＜0.0001);(2)通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC50值为2.680 μmol/L;(3)相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达(P＜0.01),HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达(P＜0.001);(4)孕激素可抑制HOXA9的表达(P＜0.0001),敲降HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显(P＜0.0001),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱(P＜0.0001);(5)孕激素使E-cadherin蛋白表达上升(P＜0.01),而Vimentin,N-cadherin蛋白表达下降(P＜0.001);敲降HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显(P＜0.05),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱(P＜0.05).结论 孕激素通过抑制HOXA9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程.