芹菜素对化学法氧糖剥夺/复氧复糖损伤大鼠心肌细胞保护作用研究

目的:研究芹菜素(API)对化学法氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用及分子机制.方法:首先给予H9c2 细胞不同浓度的氯化钴(CoCl2)或 1％O2 处理 24 h,通过测定细胞活力和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平,确定模拟 1％O2 的等效CoCl2 浓度;然后给予H9c2 细胞CoCl2 或 1％O2 处理合并无糖培养 16 h,再正常培养(复氧复糖)4h,测定细胞活力和HIF-1α的表达水平,确定OGD/R模型等效CoCl2 浓度.MTT法测定不同浓度API对OGD/R大鼠H9c2 细胞活力的影响;ELISA法检测细胞Caspase-3 含量;超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞SOD和LDH含量;采用Western印迹方法检测细胞Bcl-2、Bax、SIRT1、p62 和LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平.结果:筛选 1％O2 的等效CoCl2 浓度结果显示,与对照组相比,CoCl2(0.8 mmol/L)组细胞活力明显降低(P＜0.05),HIF-1α表达明显上调(P＜0.05)且与 1％O2 组无显著差异(P＞0.05),因此选取CoCl2(0.8 mmol/L)用于OGD/R模型.与对照组相比,OGD/R组的细胞活力及SOD含量明显下降(P＜0.05),LDH漏出量和Caspase-3 含量明显提高(P＜0.05),SIRT1、LC3Ⅱ/Ⅰ及Bcl-2 表达量均明显下降(均P＜0.05),Bax及p62 的表达量明显增加(P＜0.05);与OGD/R组相比,API(0.01～10 μmol/L)组细胞活力有显著提高(P＜0.05);10 μmmol/L API能显著提高细胞SOD含量(P＜0.05),显著降低LDH漏出量和Caspase-3 含量(均P＜0.05),明显提高SIRT1、LC3Ⅱ/Ⅰ及Bcl-2 的表达量(均P＜0.05),降低Bax及p62的表达量(均P＜0.05).结论:0.8 mmol/L CoCl2 合并剥糖16h后恢复4h可构建稳定的H9c2细胞OGD/R损伤模型,API可通过调节SIRT1增强自噬以抵抗H9c2细胞OGD/R损伤和凋亡.