骨髓间充质干细胞对K562细胞衰老的作用及Raf/MEK/ERK信号通路的影响

目的 探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性髓细胞性白血病K562细胞衰老的作用及Raf/MEK/ERK信号通路的影响.方法 从30只6～8周SPF级、体重20～30 g的C57BL/6J雄性小鼠骨髓中分离BMSCs,采用流式细胞术检测其表面抗原CD29、CD244、CD45的表达,使用成脂、成骨分化诱导液诱导后,采用油红O、茜素红染色鉴定其分化能力.将BMSCs与K562细胞按1∶4、1∶2、1∶1、2∶1的比例分别培养24、48、72 h,选择K562细胞增殖率最低的共培养时间及细胞比例作为BMSCs组,常规培养的K562细胞作为对照组进行后续实验.采用SA-β-Gal染色检测两组细胞衰老情况,Western blot检测两组p16INK4a、p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白的表达情况.结果 BM-SCs 表面标志物CD29、CD44、CD45的阳性表达率分别为89.18％、87.65％、1.16％,其在体外成功分化为脂肪细胞和骨细胞.BMSCs∶K562细胞比例为1∶2、1∶1、2∶1时,共培养各时间点的K562细胞增殖率均低于同一时间点的对照组,比例为2∶1时各时间点的K562细胞增殖率均低于同一时间点的1∶2、1∶1(P＜0.05).BMSCs∶K562细胞比例为2∶1时,共培养48 h后K562细胞增殖率均低于共培养24、72 h后(P＜0.05).BMSCs组衰老细胞阳性率及p16INK4a蛋白表达水平均高于对照组,p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达水平均低于对照组(P＜0.01).结论 BMSCs可诱导K562细胞衰老,其作用机制可能与Raf/MEK/ERK信号通路有关.