畲药小香勾香豆素类成分RP-HPLC含量测定及抗炎靶点预测

[目的]以反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法测定畲药小香勾香豆素类成分补骨脂素和佛手柑内酯的含量,并结合网络药理学和动物实验验证小香勾的抗炎作用.[方法]色谱柱为Waters C18柱(4.6 mm× 250 mm,5.0 μm),流动相A为乙腈,流动相B为0.1％甲酸溶液(体积比),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,补骨脂素检测波长245 nm,佛手柑内酯320 nm,柱温25 ℃.利用网络药理学平台收集小香勾香豆素类成分及抗炎相关靶点,利用Cytoscape 3.8.2软件建立成分-靶点网络,借助网络拓扑分析插件(Cytoscape network centrality analysis,CytoNCA)筛选抗炎核心靶点,进一步采用Metascape软件进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomics,KEGG)通路富集分析.通过二甲苯致小鼠耳肿胀法进一步验证小香勾的抗炎作用.[结果]补骨脂素和佛手柑内酯的质量浓度分别在0.51～102.00 μg·mL-1(r=0.9996)和0.24～48.00μg·mL-1(r=0.9998)时与峰面积呈良好的线性关系.通过筛选获得小香勾补骨脂素和佛手柑内酯的相关基因57个,抗炎靶点2 148个,交集靶点31个.KEGG通路富集分析发现,这些靶点主要涉及化学致癌作用-活性氧、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、癌症途径、催乳素信号通路和叶酸生物合成等信号通路.与模型对照组比较,小香勾高剂量组(400mg·kg-1)能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P＜0.01),显示小香勾具有良好的抗炎作用.[结论]建立的RP-HPLC法操作简单,灵敏度高,可用于小香勾质量控制.小香勾香豆素类成分通过多靶点多通路表现出良好的抗炎作用,为后续深入探讨小香勾抗炎机制提供了有利的科学依据.