猫细小病毒和猫疱疹病毒1型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立同时检测猫细小病毒(FPV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数(R2)均为0.999,具有良好的线性关系.结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2％.证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好.用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65％和16.85％,二者混感阳性率为15.73％,与临床确诊结果一致.上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等.